Monkeypox Virus Real Time PCR Kit

1. PrøveKollektion:Prøven skal opsamles i sterile rør i overensstemmelse

med standard tekniske specifikationer.

2. Reagensforberedelse (Reagensforberedelsesområde)

Tag komponenterne ud af sættet, afbalancer dem ved stuetemperatur til standbybrug.

3. Prøvebehandling (prøvebehandlingsområde)

3.1 Nukleinsyreekstraktion

Det anbefales at tage 200μL væskeprøver, positiv kontrol og negativ kontrol til nukleinsyreekstraktion i henhold til de tilsvarende krav og procedurer for virale DNA-ekstraktionssæt.

3.2 Lyofiliseret pulveropløsning og skabelontilsætning

Forbered Monkeypox Virus Lyofiliseret præmix i henhold til antallet af prøver.Én prøve har brug for et PCR-rør indeholdende frysetørret forblandingspulver.Negativ kontrol og positiv kontrol bør behandles som to prøver.

(1) Tilsæt 15 μL opløsningsopløsning i hvert PCR-rør, der indeholder frysetørret præmix, og tilsæt derefter 5 μL ekstraherede prøver/negativ kontrol/positiv kontrol i hvert PCR-rør.

(2) Dæk PCR-rørene tæt, svirp PCR-rørene med hånden, indtil frysetørret pulver er fuldstændigt opløst og blandet, opsaml væsken til bunden af ​​PCR-rørene ved øjeblikkelig lavhastighedscentrifugering.

(3) Hvis du bruger et almindeligt realtids-PCR-instrument til detektion, skal du overføre PCR-rør direkte til amplifikationsområdet;hvis du bruger BTK-8 til detektion, skal du udføre følgende operationer: Overfør 10 μL væske fra PCR-røret til reaktionschipbrønden på BTK-8.Et PCR-rør svarer til en brønd på chippen.Under pipettering skal du sikre dig, at pipetten er 90 grader lodret.Aerosolbarrierepipettespidserne skal placeres i midten af ​​brønden med moderat kraft og stoppe med at skubbe pipetten, når den når det første gear (for at undgå bobler).Når brøndene er fyldt, tages en reaktionschip-membran ud for at dække alle brønde, og chippen overføres derefter til amplifikationsdetektionsområdet.

4. PCR-amplifikation (detektionsområde)

4.1 Sæt PCR-rørene/reaktionschippen i reaktionstanken og indstil navnene på hver reaktionsbrønd i den tilsvarende rækkefølge.

4.2 Indstillinger for detektionsfluorescens: (1) Abekoppevirus (FAM);(2) Intern kontrol (CY5).

4.3 Kør følgende cykelprotokol

Protokol for ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:

 Protokol for BTK-8:

5. Analyse af resultater (se venligst instrumentets brugermanual）

Efter reaktionen gemmes resultaterne automatisk.Klik på "Analyser" for at analysere, og instrumentet vil automatisk fortolke Ct-værdier for hver prøve i resultatkolonnen.De negative og positive kontrolresultater skal være i overensstemmelse med følgende "6. Kvalitetskontrol".

6. Kvalitetskontrol

6.1 Negativ kontrol: Ingen Ct eller Ct>40 i FAM-kanal, Ct≤40 i CY5-kanal med normal amplifikationskurve.

6.2 Positiv kontrol: Ct≤35 i FAM-kanal med normal amplifikationskurve, Ct≤40 i CY5-kanal med normal amplifikationskurve.

6.3 Resultatet er gyldigt, hvis alle ovenstående kriterier er opfyldt.Ellers er resultatet ugyldigt.

Resultatfortolkning

Følgende resultater er mulige:

BEMÆRK: Hvis der opstår et ugyldigt resultat, skal prøven indsamles og testes igen.